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Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A是一种优化的无血清添加剂，基于原始的B-27，去除了维生素A(视黄醇乙酸酯)。维生素A能被转化为视黄酸，而视黄酸可以诱导神经干细胞的分化。不含维生素A的Neural-27与合适的基础培养基结合后，适用于多能干细胞(PSC)衍生的神经祖细胞扩展，以及原代神经干细胞和神经祖细胞的生长和活性维持，可培养悬浮的神经球，不会诱导其分化。

• 去除维生素A以支持神经干细胞扩增以及特定的分化流程。
  
• 提高神经干细胞增殖速度，提高存活率。
  
• 维持神经干细胞表型和分化特性。
  
• 无血清培养系统，优化配方。
  
• 注射用水配制，符合cGMP规定生产，工艺稳定，批差异小。
  
• 原料均选用自产或者经过严格检测和纯化的低内毒素高纯药用级别原料。
  
• 严格的质量检测程序，远高于同行业要求指标，产品性能突出，指标优于进口。
  
• 进口材质无菌包装瓶，符合cGMP管理规定，优秀的密闭性及内部涂层保护，极大的保证了产品的稳定性。

• 本产品不含维生素A，如有其他实验需求可自行添加。
  
• 本产品为无菌包装，请注意无菌取用。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

• 于4℃过夜解冻本产品。
  注：如果不立即使用，请分装并保存在-20℃，避免反复冻融。
  
• 无菌条件下添加10mL Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A到485mL的DMEM/F-12(我司货号：LA10068)中。
  注：如果不立即使用，请在2～8℃下保存，一个月有效。
  
• 使用前请补充以下成分到培养基中：
  
  • 加入5mL L-谷氨酰胺(200mM)(我司货号：LA10109)，终浓度为2mM；
    
  • 加入10μg rhEGF(我司货号：LA10402)，终浓度为20ng/ml；
    
  • 加入5μg rh-bFGF(我司货号：LA10401)，终浓度为10ng/ml；
    
  • 加入终浓度为2μg/ml的肝素钠。
    注：NSC完全培养基在2～8℃下可保存1周，请不要冻融培养基。

• 接种原代小鼠中枢神经系统(CNS)细胞
  
  • 将CNS来源的细胞置于10mL NSC完全培养基中，细胞密度如下：
    胚胎CNS来源的细胞：8×10⁴ cells/cm2
    成年CNS来源细胞：2×10⁴ cells/cm2
    
  • 置于37℃，5% CO2的恒湿培养箱中培养。
• 神经干细胞球传代培养
  
  • 当神经球直径达到100～150μm时(通常原代接种后5～8天达到)，应传代。请不要让神经球长得太大(直径>200μm))，大的神经球核心的细胞将缺乏适当的气体交换和养分而导致坏死。
    
  • 收集所有细胞悬液到一个15mL或50mL离心管中。
    
  • 将细胞悬液经90～140g离心5分钟后，去除上清液。
    
  • 向细胞沉淀物中加入1mL NSC完全培养基重悬，并用移液枪吹打20～30次，直到制成单细胞悬液(用力吹打，但不要将气泡引入悬液中)。
    
  • 加入足量NSC完全培养基，重新接种细胞，调整密度如下：
    胚胎CNS来源的细胞：2×10⁴ cells/cm2
    成年CNS来源细胞：4×10³ cells/cm2
    
  • 置于37℃，5% CO2的恒湿培养箱中培养。

• 促小鼠神经干细胞增殖效果检测：
  方法：分别使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)和进口G品牌的B-27(去除维生素A)培养C57/BL-6小鼠胎脑中提取的神经干细胞(NSC)，72h后进行细胞计数和存活率检测。
  结果：如图1所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的神经球增殖的细胞数更多，存活率与对照相近。如图2所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的NSC生长状态良好。
  

  图1．Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A培养NSC后细胞数和存活率的比较	图2．Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A培养NSC后细胞生长状态的比较

  
  
  
• 促C17.2细胞增殖效果检测：
  方法：分别使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)和进口G品牌的B-27(去除维生素A)培养C17.2细胞，72h后进行细胞计数和存活率检测。
  结果：如图3所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的C17.2细胞增殖的细胞数更多，存活率与对照相近。如图4所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的C17.2细胞生长状态良好。
  

  图3．Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A培养C17.2后细胞数和存活率的比较	图4．Neural-27添加剂(50X)，去除维生素A培养C17.2后细胞生长状态的比较

  
  
  
• 小鼠神经干细胞培养后纯度和分化检测
  方法：使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养NSC细胞，一段时间后进行纯度和诱导分化的免疫组化鉴定。
  结果：如图5所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的NSC细胞Nestin(巢蛋白)表面标记＞75%，免疫组化结果呈阳性。说明BalbCell Neural-27(去除维生素A)可以维持神经干细胞表面标志物的表达。如图6所示，使用BalbCell Neural-27(去除维生素A)培养的NSC细胞经诱导分化后β-Tubulin(神经元特异蛋白)表面标记＞10%，GFAP(星状胶质细胞特异蛋白)表面标记＞50%，免疫组化结果呈阳性。说明BalbCell Neural-27(去除维生素A)可以维持神经干细胞的分化特性。
  
  图5．NSC纯度免疫组化鉴定结果图
  
  图6．NSC诱导分化免疫组化鉴定结果图